ctab提取dna流程图_质粒、噬菌体和细菌胞外DNA提取方法

质粒的提取

细菌中的质粒是一类双链、闭和环状的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。质粒通常存在于细胞质中，其是独立于细胞染色体之外的、具有自主复制能力的遗传单元，通常情况下可持续稳定地在宿主细胞内复制并传代，质粒目前已成为最常用的基因克隆载体。

碱裂解法提取质粒DNA

碱裂解法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，当加入中和液后，质粒DNA分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中，蛋白质与染色体DNA不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。

碱裂解法具有快速、得率高、几乎无基因组DNA污染等特点，使用该方法所得的质粒DNA能够满足细菌转化、DNA片段酶切、常规克隆及标记等基本分子生物学实验的要求。

注意事项

1. 裂解液和菌体的比例，为了保证菌体的充分裂解从而达到最佳的提取效果，裂解液和菌体的比例十分重要，要按照实际的实验所需，确定所用菌体的量，之后根据试剂盒的推荐，选择合适的裂解液与菌体比例；
2. 蛋白质的沉淀，在4℃下蛋白质沉淀效率较高，因此，在加入Solution III后可在4℃静置一段时间并采用4℃离心，以提高蛋白质的去除效果；
3. 质粒的纯化，碱裂解法提取的质粒DNA不经其它纯化步骤就已经具有了较高的纯度，配合其它纯化方法，如氯仿/醇沉淀、吸附柱等，可以获得纯度很高的质粒；
4. RNA的去除，在Solution I 中加入RNase A (100μg/mL) 可以