FITC(荧光素异硫氰酸酯)抗体与金纳米粒子的偶联标记是一种常用的生物标记技术,广泛应用于免疫检测、细胞成像和生物传感器等领域。
材料准备
FITC标记的抗体:选择合适的抗体并确认其已标记为FITC。
金纳米粒子:可以选择不同尺寸和形状的金纳米粒子(例如球形、棒形、星形等)。常用的金纳米粒子直径为10-100 nm。
缓冲液:使用PBS(磷酸盐缓冲液)或其他适合的生物缓冲液。
偶联试剂(可选):如EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide)或NHS(N-hydroxysuccinimide)可用于提高偶联效率。
偶联步骤
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金纳米粒子的制备:
- 选择合适的方法(如柠檬酸还原法、溶剂热法等)合成金纳米粒子,控制粒径和形状。
- 对金纳米粒子进行表面修饰,通常使用聚乙二醇(PEG)或其他聚合物,以提高其生物相容性和稳定性。
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抗体的准备:
- 确保FITC抗体在合适的浓度下,并使用缓冲液稀释。
- 通过透析或超滤去除抗体溶液中的小分子杂质。
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偶联反应:
- 将金纳米粒子与FITC抗体混合。可以考虑将金纳米粒子先与EDC和NHS处理,以活化金表面,增加与抗体的结合能力。
- 在适当的温度下(例如室温或4°C)孵育一定时间(如1-2小时),以促进抗体与金纳米粒子的偶联。
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洗涤和纯化:
- 使用离心、透析或凝胶过滤等方法去除未结合的抗体和偶联试剂。
- 将偶联后的金纳米粒子重悬于合适的缓冲液中,以保证其稳定性。
QY小编zyl分享2024.10.15