细胞传代操作全指南：把握时机，杜绝污染，附核心原理与实操细节

在细胞培养过程中，传代是维持细胞活性与增殖的核心环节。一步操作失误，轻则导致细胞活性下降，重则引发污染或细胞死亡。本文结合实操经验，详细拆解细胞传代的关键原理、操作步骤及注意事项，帮助科研人员稳定掌握传代技巧，减少实验失误。

一、细胞贴壁与胰酶作用的核心原理

传代操作的前提是理解细胞的生长特性与消化机制，尤其是贴壁细胞（如 HeLa、CHO 细胞）的传代，需重点掌握以下原理：

1. 贴壁细胞的生长特性

贴壁细胞多来源于实体器官，其生长依赖 “附着点”：

• 细胞会分泌细胞外基质（如胶原蛋白、纤维连接蛋白），形成自身生长的 “支架”；
• 通过细胞膜上的黏附分子（如整合素）与基质结合，同时细胞间通过黏附分子相互连接，最终呈现 “铺路石状” 或 “纤维状” 单层生长。
• 若无法稳定贴壁，细胞会因缺乏支撑而死亡，因此贴壁稳定性是此类细胞存活的基础。

2. 胰酶的消化机制

贴壁细胞的 “固定” 依赖两种连接：一是细胞与瓶底细胞外基质的结合，二是细胞间的相互黏连。胰酶作为一种蛋白酶，其核心作用是：

• 特异性切断上述连接中蛋白质的肽键，破坏细胞与基质、细胞与细胞间的黏附；
• 使细胞从瓶底脱离，同时打散细胞团，形成单细胞悬液，为后续均匀传代奠定基础。

注意：胰酶的作用具有特异性，但其活性会被血清抑制，这也是后续用含血清培养基终止消化的原理。

3. 消化状态的判断标准

消化是传代的关键步骤，“恰到好处” 的消化直接影响细胞活性：

• 消化不足：细胞仍紧密贴附于瓶底，形态完整，晃动培养瓶无明显脱落；
• 消化适中：镜下可见细胞逐渐变圆、回缩，细胞间隙增大，轻晃培养瓶时部分细胞随液体漂浮；
• 过度消化：细胞变圆后出现皱缩、破裂，瓶底可见细胞碎片，此时细胞活性已受损，后续难以培养。