人和小鼠表面抗原密度及其测量方法

本文介绍了如何通过荧光素与细胞表面抗原的配对优化细胞群体分辨率,包括抗原密度的测量方法,如使用抗体结合珠、荧光强度数据和创建标准曲线。同时,详细列举了人和小鼠细胞标记物的抗原密度数据以及Quantum系列校准微球的应用。

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表面抗原密度

细胞携带的抗原或靶分子的数量与阳性群的强度直接相关, 并将决定与其匹配的最佳荧光素。

将荧光强度低的荧光素与高表达抗原配对, 将荧光强度强高的荧光素与低丰度抗原配对, 可以提高细胞群体的分辨率, 但是如何得知抗原密度呢?

本指南列出了一些常见的人和小鼠细胞表面标记物的抗原密度, 以帮助您选择正确的荧光素。另外提供了如何使用抗体结合珠测量抗原密度的方法。

常见人标记物的抗原密度

新鲜分离的外周血细胞表面发现的常见标记物的抗原密度。

人和小鼠表面抗原密度及其测量方法

图 1.21 种常见人类标记的数据。获得每个表面标记物的几何平均荧光强度,并将其转换为抗原密度, 并以对数刻度绘制。图中结果来自于正常人外周血的 4 次独立实验结果。在 Bio-Rad ZE5 流式细胞分析仪上获取数据并在 FlowJo 中进行结果分析。

荧光素亮度

本示例说明了 CD4 与更亮荧光素(PE)配对可以提高分辨率。

人和小鼠表面抗原密度及其测量方法

图 2. 荧光素的相对亮度。外周血 CD4 染色的示例显示了 3 种荧光团从暗(Pacific Blue)到亮(PE)的相对亮度。显示的数据是在 Bio-Rad ZE5 流式细胞分析仪上获得的。

常见小鼠标记物的抗原密度

C57BL/6 小鼠的新鲜分离的脾脏细胞表面的常见标记物的抗原密度。

人和小鼠表面抗原密度及其测量方法

图 3.16 种常见小鼠标记物的数据。获得每个表面标记物的几何平均荧光强度, 并将其转换为抗原密度, 并以对数刻度绘制。图中数据来自于 C57Bl/6 小鼠的 3 次独立实验的结果。在 Bio-Rad ZE5 流式细胞分析仪上获取数据并在 FlowJo 中进行结果分析。

更多Bio-Rad(AbD Serotec)产品及产品技术问题,请联系授权代理商欣博盛生物

荧光素配对

为了获得最佳结果, 应将低密度抗原与明亮的荧光素配对, 将高密度抗原与较暗的荧光素配对。

人和小鼠表面抗原密度及其测量方法

图 4. 染色示例。 A, 人外周血单核细胞用 CD14 A700 和 CD163 A488 染色。B, 小鼠骨髓细胞用CD11b PB 和 GR-1 FITC 染色。在 Bio-Rad ZE5 流式细胞分析仪上获取数据。

星光染料分类已上市和待上市染料
StarBright Blue 

(488 nm)

SBB510,SBB575,

SBB610,SBB670,

SBB700,SBB750,

SBB780

StarBright Violet 

(405 nm)

SBV440,SBV475,

SBV515,SBV570,

SBV610,SBV670,

SBV710,SBV760,

SBV790

StarBright UV

(355 nm)

SBUV400,SBUV445,

SBUV510,SBUV575, 

SBUV605,SBUV665, 

 SBUV750,SBUV795

全新流式染料星光系列:更亮的亮度, 更窄的发射波普, 缓冲液兼容性好, 染色一致性好(具体见上表)。

四个简单步骤测量抗原密度

Quantum 系列校准微球有 FITC 和 PE 两种荧光标记可选根据对应的检测抗体的荧光素来选择, 微球大小近似于人类淋巴细胞, 中级强度的试剂盒可以很好地涵盖典型细胞样品的范围。结合标准曲线, 可以计算待检测抗原的密度。该种方法也可用于确定流式细胞仪线性度。

1、滴定抗体

通过合适的抗体浓度找到最佳的染色指数。

人和小鼠表面抗原密度及其测量方法

2、微球染色

确保微球的量是饱和的。珠子的荧光强度随着抗体结合能力 ( ABC ) 而增强。

人和小鼠表面抗原密度及其测量方法

3、创建标准曲线

使用半高/全宽门测量几何平均值, 创建针对抗体结合能力的荧光标准曲线。

人和小鼠表面抗原密度及其测量方法

4、测量抗原密度

使用阳性群体的几何平均荧光强度, 可以计算感兴趣细胞上任何抗原的密度。

人和小鼠表面抗原密度及其测量方法

Bio-Rad 于 2013 年 1 月收购了知名抗体公司 AbD Serotec。该公司成立于 1982 年, 总部位于英国牛津。提供上万种抗体和免疫学试剂、单抗制备和多种规模的抗体生产和标记服务。其宗旨为生产高质量的抗体和免疫学试剂。该公司拥有最具特色的大鼠 CD68 单抗(克隆号: ED1); 抑制素 A 检测试剂盒为专利产品; 将 SpyTag 技术引入 HuCAL 平台, 提供非动物来源的抗体定制服务。欣博盛生物是Bio-Rad授权代理,如需咨询Bio-Rad收购的AbD Serotec产品线及产品技术问题,请联系我们。

资源下载链接为: https://pan.quark.cn/s/67c535f75d4c C语言作为一门基础且强大的编程语言,在底层系统编程和算法实现方面表现卓越,其效率与灵活性备受推崇。其中,“用指针实现的C语言排序算法”这一主题,融合了C语言的核心概念——指针,以及数据结构和算法的基础知识。指针是C语言的一大特色,它能够直接操作内存地址,从而为高效的数据操作提供了有力支持。在排序算法中,指针通常被用作迭代工具,用于遍历数组或链表,进而改变元素的顺序。 常见的排序算法,如冒泡排序、选择排序、插入排序、快速排序和归并排序等,都可以借助指针来实现。具体而言: 冒泡排序:通过交换相邻元素来实现排序。在C语言中,可以定义一个指向数组的指针,通过指针的递增或递减操作来遍历数组,比较相邻元素并在必要时进行交换。 选择排序:每次从剩余部分中找到最小(或最大)元素,然后将其与第一个未排序的元素进行交换。指针可用于标记已排序和未排序部分的边界。 插入排序:将元素插入到已排序的部分,以保持有序性。可以使用指针跟踪已排序部分的末尾,并在找到合适位置后进行插入操作。 快速排序:采用分治策略,选择一个“基准”元素,将数组分为两部分,一部分的所有元素都小于基准,另一部分的所有元素都大于基准。这一过程通常通过递归来实现,而基准元素的选择和划分过程往往涉及指针操作。 归并排序:将数组分为两半,分别对它们进行排序,然后再进行合并。在C语言中,这通常需要借助动态内存分配和指针操作来处理临时数组。 在实现这些排序算法时,理解指针的用法极为关键。指针不仅可以作为函数参数传递,从而使排序算法能够作用于任何可寻址的数据结构(如数组或链表),而且熟练掌握指针的解引用、算术运算和比较操作,对于编写高效的排序代码至关重要。然而,需要注意的是,尽管指针提供了直接操作内存的便利,但不当使用可能会引发错误,例如内存泄漏、空指针
资源下载链接为: https://pan.quark.cn/s/f989b9092fc5 在电子设备设计中,多功能按键的实现是至关重要的技术,它能够为用户提供丰富多样的交互方式,比如单击、双击和长按等操作。本文将深入探讨如何设计一个多功能按键系统,涵盖按键识别逻辑、接口函数设计,以及如何避免使用定时器。 首先,我们需要理解多功能按键的基本原理。在硬件层面,按键通常是通过连接到微控制器(MCU)的一个输入引脚来实现的。当按键未被按下时,该引脚保持高电平;而当按键按下时,引脚会与地短路,变为低电平。因此,通过检测该引脚的状态,就可以判断按键是否被按下。 接下来,我们来探讨如何识别不同的按键操作。单击是最基本的操作,通常定义为按键快速按下并释放。双击则是在短时间内连续两次单击,而长按则是按键被按下并持续一段时间。为了实现这些功能,我们需要在软件中加入一些延时处理。例如,当我们检测到按键按下事件后,可以启动一个短暂的延时。如果在此期间再次检测到按键按下,则判断为双击;如果延时结束仍未检测到第二次按下,则认为是单击。对于长按操作,可以设定一个较长的延时,如果按键在这段时间内一直保持按下状态,则识别为长按。 接口函数设计是软件工程中的重要环节。对于多功能按键,我们可以设计以下核心接口: void Key_Init(void):初始化按键,设置中断或轮询模式,并设置初始状态。 uint8_t Key_Scan(void):扫描按键状态,返回当前按键的操作类型,例如,0表示无操作,1表示单击,2表示双击,3表示长按。 void Key_Callback(uint8_t key_event):这是一个注册的回调函数,根据Key_Scan()返回的事件类型执行相应的操作。 在实际应用中,为了避免频繁的中断请求和降低功耗,我们有时会选择使用延时而非定时器。延时函数可以通过循环计数实现,例如,使用
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