AbMole小课堂 | 如何用H2DCFDA精准检测细胞氧化应激？

活性氧（ROS）在细胞的生命活动中扮演着极为重要的角色，涉及到细胞的衰老、死亡、癌变。对ROS的检测是许多课题中的关键实验之一。H2DCFDA（DCFH-DA，AbMoel，M9096）是一款灵敏的ROS探针，为科研工作者提供了重要的研究工具。AbMole为全球科研客户提供高纯度、高生物活性的抑制剂、细胞因子、人源单抗、天然产物、荧光染料、多肽、靶点蛋白、化合物库、抗生素等科研试剂，全球大量文献专利引用。

一、H2DCFDA（DCFH-DA）的机理

H2DCFDA（2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯，AbMole，M9096）是一种常用的活性氧（ROS）荧光探针，广泛应用于细胞生物学、生物化学和分子生物学等领域的研究。H2DCFDA是一种细胞渗透性指示剂，在细胞内的酯酶作用下，其乙酸基团被去除，产物为H2DCF。此时处于非荧光状态，并且无法再通过细胞膜。当细胞内存在氧化环境时，H2DCF会被氧化为发绿色荧光的2,7-二氯二氢荧光素（DCF，EX/EM = 488/525 nm），从而可用于检测细胞内ROS的水平。

图 1. H2DCFDA检测ROS的原理

二、H₂DCFDA（DCFH-DA）的研究应用

H₂DCFDA（DCFH-DA，AbMole，M9096）作为一种细胞渗透性探针，能够有效检测细胞内的氧化应激和ROS水平。H₂DCFDA可以检测过氧化氢（H₂O₂）、超氧阴离子（O2⁻）、羟基自由基（·OH）和过氧亚硝酸盐（ONOO⁻）等ROS。一般可将细胞与H2DCFDA（多数情况下浓度为10 µM）孵育30分钟，然后用流式细胞术或者荧光显微镜进检测。注意染色过程中要使用无血清的培养基，以免影响检测结果。

近年来，铁死亡（Ferroptosis）研究取得了显著进展，H₂DCFDA作为检测工具在其中发挥了重要作用。通过检测细胞内的ROS水平，并结合ABDP 581/591 C11（AbMoel，M29325）进行脂质过氧化检测，以及CCK-8（AbMole，M4839）等进行细胞活力分析，可以分析细胞死亡的主要原因和类型。2014年，AbMole的两款抑制剂分别被西班牙国家心血管研究中心和美国哥伦比亚大学用于动物体内实验，相关科研成果发表于顶刊 Nature