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鉴定脂肪组织巨噬细胞（ATM）分泌外泌体鉴定ATM能否分泌外泌体:为了确认脂肪组织巨噬细胞（ATM）是否可以外泌体，从肥胖野生型小鼠的内脏脂肪组织（VAT）中分离出脂肪组织巨噬细胞(ATM)（CD11b+F4/80+），并培养72小时，电子显微镜和纳米观察分析（图）显示，通过超速离心分离的颗粒含有丰富的ATM分泌的胞外小泡，其直径为30-100 nm。这些EV的密度梯度超速离心分析证实，它们主要由Exos组成，通过外体特异性蛋白标记物TSG101、syntenin1、CD63等的表达得到证明，主要以

外泌体标记检测亲脂性染料 :PKH-67（green）/PKH-26（red）染料可以稳定的与细胞膜脂质区结合并发出荧光，主要用于细胞体外标记、体外细胞增殖研究以及体内外的细胞失踪研究。PKH67标记外泌体被巨噬细胞吸收亲脂性羰花青染料（carbocyanine dyes）:DiI/DiD/DiO/DiRDiI, DiO, DiD, DiR是一系列亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。DiD标记的外泌体与PC12细胞孵育3H后共聚焦观察的结果结果所示体内

DIR染料标记外泌体鼠体实验实验说明：通过DIR染料标记外泌体，通过尾静脉注射DIR-labeled Exosome，24小时内观察外泌体在体内的代谢情况。实验前的准备工作：DIR- Exosome，裸鼠；DIR-Exosome：染料终浓度1uM，外泌体200ug，体积200ul；Exosome来自HEK293无血清培养基（Umibio，UR51102）条件下获得，通过外泌体提取试剂盒提取（Umibio，UR52121）。实验操作进行：1、通过尾静脉注射200 ug/支的DIR- Exoso

外泌体的三种分离方法及其临床意义外泌体的三种分离方法： / 方法 优势 劣势 超速离心法 利用分子的大小比重物理法离心； 较常用方法，可大量提取，使用样品种类较多，成本低。 操作繁杂，时间较长，造成的损耗较大，需要超速离心机 多聚物沉淀法 使用多聚物的沉淀法 操作简单，时间较短，不

据研究报道，很多癌细胞分泌的外泌体 (Exosome) 比正常细胞分泌的多 10 倍以上。外泌体参与了癌症的发生、进展、转移和耐药性，并通过转运蛋白和核酸，建立与肿瘤微环境的关系。图 1. 外泌体在维持癌症抗性中的主要作用外泌体含有丰富的蛋白质，除了其来源细胞从头合成的蛋白，还包含其它细胞的蛋白，并具有以下特性，使其有希望成为用于癌症监测和功效评估的生物标记。1、外泌体中与癌症相关的蛋白、脂质、mRNA、非编码 RNA、DNA 可用于检测癌症；2、外泌体体积小，具有优越的穿过各种组织..

外泌体用于药物载体的应用应用一：促进 KRAS 突变的胰腺癌靶向治疗—通过基因工程的方法，在外泌体中转入靶向 KRASG12D 的 siRNA 或 shRNA (称为 iExosome)，在多种胰腺癌模型中表现出良好的疗效。经Exosome 治疗的胰腺癌小鼠，其肿瘤生长明显抑制，且 iExosome 不影响原位 BxPc-3 KRASWT 肿瘤的生长。和传统的 RNAi 药物载体脂质体相比，iExosome 更加高效，一方面，因为外泌体作为纳米级的囊泡，更加自如轻松的在体内循环作用靶细胞；另一方面，要归功