实验
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阿梓梓梓
这个作者很懒,什么都没留下…
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蛋白表达常见问题分析
原创 2020-08-19 20:03:18 · 691 阅读 · 0 评论 -
我所遇到的困惑——大肠杆菌越摇越清亮
我取的-20度甘油保存的菌,过夜复苏,然后按1:100扩大摇一段时间之后加IPTG诱导,摇了3小时之后培养物居然变清亮了!我白思不得其解望高手指点一下!你说的培养物变清凉是相对于1%接种后而言的吗?1:100扩大培养后,细菌变得有多浑浊(测定OD600,一般达到0.5-1.0)?如果加入IPTG后细菌生长得很慢属于正常现象,因为IPTG对细胞有毒性,加之有抗性压力,不携带质粒的细胞是不生长的.关于你遇到的情况,我想可能是:1.工程菌的问题,可能携带的质粒已经丢失,工程菌不具有抗性,建议在诱导前先检测一原创 2020-08-19 19:47:16 · 9867 阅读 · 0 评论 -
IPTG诱导蛋白表达的原理
IPTG诱导的产物是重组后表达载体中的插入序列所能够翻译的蛋白,并可视载体构建情况翻译后续的标签序列。用乳糖操纵子作为启动子进行蛋白质表达的时候,需要诱导物进行诱导(相当于点火),但乳糖可以被细胞利用掉,所以利用IPTG(异丙基-β-D硫代半乳糖苷)在结构.上与乳糖的相似性也可以将基因表达启动,但它不能被细胞利用掉,从而实现持续的表达.IPTG是一种诱导外源基因表达的诱导剂,它不仅仅如我们学过的作为乳糖的类似物诱导大肠杆菌表达半乳糖苷酶,它是一种普遍应用的诱导剂,能诱导菌种表达多种外源基因。但是它能原创 2020-08-19 16:35:06 · 21232 阅读 · 0 评论
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