单细胞转录组测序技术包括哪些？

单细胞转录组测序技术基于以下原理：首先，将分离的单个细胞的微量全转录组RNA进行扩增；然后，对扩增后的RNA进行高通量测序，以获得单个细胞的转录组信息。

1、主要技术方法

1. SMART-seq技术：

   • 由美国和瑞典科学家共同开发，使用莫洛尼鼠类白血病病毒逆转录酶（MMLVRT）逆转录全部RNA。
   • 加入PCR引物进行常规PCR扩增，再将扩增的cDNA打断，用于构建标准的测序文库。
   • SMART-seq2是SMART-seq的改进版，在逆转录步骤中增加了甜菜碱和Mg2+的浓度，在第二链合成时增加了锁定核苷酸（LNA），使cDNA的形成更加完整、产量更高。

2. 10×genomics技术：

   • 基于Drop-Seq技术，由10×genomic公司于2016年推出。
   • 采用液滴式微流控技术，将单个细胞与微珠（微珠上连接标签、UMI和ploy(dT)VN序列）包裹在一个油滴内。
   • 在每个油滴内，凝胶珠溶解，细胞裂解释放mRNA，通过逆转录产生用于测序的带标签的cDNA。
   • 油滴破坏后对cDNA进行文库构建，再使用测序平台对文库进行测序检测，即可一次性获得大量单细胞的基因表达数据。

3. MALBAC技术：

   • 由哈佛大学谢晓亮院士发明，即多次退火环状循环扩增技术。
   • 可以对单个细胞、单条染色体或者0.5皮克的RNA进行高保真扩增。

此外，还有BD RhapsodyTM单细胞分析系统、华大智造DNBelab C4便携单细胞系统等技术平台，它们在不同方面对单细胞转录组测序技术进行了优化和改进。

2、技术应用

包括但不限于：

1. 解析复杂的肿瘤微环境：通过单细胞转录组测序，可以解析肿瘤微环境内的细胞构成，为肿瘤的治疗提供新的思路。
2. 研究细胞分化发育：在细胞分化发育过程中，存在许多细胞的变化。通过单细胞转录组测序，可以解析这个复杂动态的过程，为细胞生物学研究提供有力支持。
3. 疾病预防与治疗：单细胞测序技术提供了一种以无偏见的方式了解单个细胞对疫苗接种反应的方法，可以提高识别有利免疫学特征的能力。同时，它还可以分析耐药的机制，探索新的治疗靶点，筛选受益人群，建立有效的治疗方案。