signature=a335cd7040789f936f75c72e4ba37676,猪肠毒素源性大肠杆菌K88ac粘附抗原的核苷酸序列分析...

一 f

第6卷第 2期

1990年 4月

年} )

VO1．6．No．2

A pr．， 1990

猪肠毒素源性丈肠杆菌K88ac粘附

_

抗原的核苷酸序列分析

石成华 孙苏华 ／ 宋一鸣 陈锦光 黄翠芬

．

— — — 一 V

(军事 医学科学 院 L钉 工程研 究所， 北求) ， J

了 2 ／／

摘要 本文对国内流行的猪脑毒素源性大肠杆菌K88ac抗原的结构基目的 核 苷 琏

序刘进行了测定。该基目由849对核苷醚组成，编码 了283个氨基酸曲蛋白亚单位及

21个氮基琏的信号肤 与国外报道的K88ac序列酌不同是我们发现一个碱 基 的点

突变，导致在抗原决定簌

与另两种亚型进行 了比较

关键词；大肠杆菌K88ac

肠 莓素源性大肠杆菌的致病机理是依靠菌体表面的伞毛——一种专一性的定居周子与宿

主小肠上皮细胞发生特异性的粘附、定居和大量繁殖并分泌肠素毒，从而引起仔猪的急性腹

泻 [1-3】。 伞 毛 或 粘附定居因子是蛋白质，具有抗原性。一 根 伞毛由数百个相同的蛋白亚

单位组成。根据免疫交叉反应，K88抗原至少有三种不同亚型的抗原变种，即K88ab，K88ac

和 K88ad ，我 国以 K88ac为主 。每 种亚墅都有一个共同的 “a”抗原囡手，加上一个

可变的 “b”、“c一或 “d”抗原因子。每一种抗原园子又由一个或多个抗原决定凌组 成。用

遗传重组技术，已经获得含有 K88ab、K88aC或 K88ad粘附抗原基因的克隆株，并对其性质

进行了研究 [e-B]。 K88抗原基因由分子量为 50×i0 Md的非结合型大质粒所编码 ，位于

7．7Md大小的 ~{indni片雕内。近年来，国外已测定了三种不同亚型 K88的棱苷酸序列和氯

基酸序列 [1 ”J。

我室于1985~．“ 成功地l构造了含有 7．5MdHindⅢ片段的 K88ac粘 附抗原基因的克隆

株，利用体外缺失将编码 K8 c的 HindⅢ 片段再减小 3．4Md，获得 了亚克隆株并用于构建

预防仔猪腹泻疫苗的研究。

为了解国内流行的 K88ac抗原基因的一级结构，更好地阐述伞毛抗原的结构和功能关系

以及三种亚型进化上的关系，我们对该基因的垒序列进行测定，并与另两种亚型的序列进行

比较

材 料 和 方 法

一

， 酶和试剂 限制性内切酶 HindIl，EcoRI，PstI，BsteⅡ，Hind1，T4DNA连接

收稿 『1蚋 t 19 B8 11—1f，修 『1】 ： 98目一04—0,1

134

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酶及 DNA多聚酶 I为Biolabs产品。四种单脱氧和双脱氧核苷酸、异丙基硫 代口一D一半乳糖

苷 (IPTG)及5一溴一4一氯一3一吲噪一口一D-半乳糖苷 (x—GaD 为 Sigma产品。 。一 。 P~dATP比

活性 ～3000 ci／ mmol为 Amersham 产品。

二、菌株 E．eoli RRI(pMM 032)其中的 pMM 032质粒含约 4 1Md的 K88ac抗 原 基因

及 pBR322载体基因。序列测定用菌株为 E．coli JM101 ．

三、pMM032质粒 DNA的制备 按文献l4进行，经氯毒素扩强后，以 氯 化 铯／溴化乙

锭梯度离心纯化。

四、克隆 K88ac基因片段

pMM032质粒 DNA以 EcoR I／