40、骨肉瘤细胞适体的筛选与鉴定

骨肉瘤细胞适体的筛选与鉴定

1. 引言

小分子DNA或RNA寡核苷酸配体在医学和其他生物科学领域得到了广泛的研究和应用。这些配体能够折叠成三维结构，与氨基酸、肽、细菌、蛋白质和完整细胞等目标物质进行识别和相互作用，展现出与抗体相似的选择性结合和亲和力。与抗体相比，它们具有低毒性、低免疫原性和较短的血液停留时间等优势，因此被用作肿瘤标志物的探针或适体，如血小板衍生生长因子（PDGF）、血管内皮生长因子（VEGF）和人表皮生长因子受体3（HER3）等。

适体通常通过指数富集配体系统进化技术（SELEX）产生。根据研究和应用目的的不同，已经发展出了毛细管电泳 - SELEX、复合靶标 - SELEX、消减 - SELEX和细胞 - SELEX等多种技术。细胞 - SELEX技术包括将单链DNA（ssDNA）或RNA文库池与靶细胞孵育，然后通过加热细胞 - ssDNA复合物从细胞中回收与靶细胞结合的序列，再通过PCR扩增回收的序列，生成新的ssDNA或RNA文库池用于下一轮筛选，重复这个过程直到特异性识别靶细胞的序列得到富集。

骨肉瘤是儿童中最常见的骨癌，诊断年龄通常在15岁左右。在青少年后期，男性患骨肉瘤的几率高于女性，此外，60岁以上的人群也较为常见，但其病因尚不清楚。目前，骨肉瘤的诊断依赖于影像学、血清学和病理学的综合分析，这种诊断方法需要较长的时间。由于癌症相关基因的异常表达和蛋白质结构的改变，骨肉瘤细胞在形态和生物学行为上发生了一些变化，细胞表面的表位比正常细胞更为复杂。因此，利用细胞 - SELEX技术筛选能够高特异性和高亲和力地识别和结合骨肉瘤细胞的DNA寡核苷酸配体序列是可行的。

2. 实验结果

2.1 PCR条件优化