【AbMole】单细胞凝胶电泳实验详细指南

实验原理：

1. DNA损伤检测：细胞DNA链断裂时，超螺旋结构受损，在碱性条件下解螺旋，损伤片段在电泳中向阳极移动形成彗星状拖尾。
2. 荧光观察：未损伤DNA保持原位，染色后成圆形荧光团，便于观察损伤情况。

实验用途：

DNA损伤评估：用于评价单个细胞的DNA损伤，适用于生物反应研究和肿瘤治疗预测。

材料与仪器：

1. 试剂：低熔点琼脂糖、正常熔点琼脂糖、PBS、TBE、溴化乙锭（EB）、Tris-HCl溶液、RIPA细胞裂解液等。
2. 设备：荧光显微镜、核酸电泳仪、载玻片、盖玻片等。

实验步骤：

1. 细胞准备：

   1. 使用胰酶将细胞从培养皿或培养瓶中消化下来，确保消化过程充分，避免细胞过度消化或消化不足。
   2. 将消化后的细胞收集到离心管中，并进行细胞计数，以调整细胞密度至10^5~10^6个/ml。这通常通过加入适量的PBS缓冲液来实现。

2. 第一层凝胶制备：

   1. 取80 μl的0.5%正常熔点琼脂糖溶液，滴加到预热至适宜温度的载玻片上。注意温度控制，避免琼脂糖过快凝固。
   2. 迅速盖上干净的盖玻片，确保没有气泡产生，然后将载玻片放置在4℃环境中静置10分钟，使琼脂糖完全凝固。

3. 第二层凝胶（含细胞）制备：

   1. 取10 μl含有约10000个细胞的PBS溶液，与75 μl的0.5%低熔点琼脂糖溶液在37℃条件下混合均匀。注意混合时要轻柔，避免产生气泡。
   2. 轻轻揭去第一层凝胶上的盖玻片，将含细胞的低熔点琼脂糖混合液滴加到第一层凝胶上，并立即盖上新的干净盖玻片。