药物靶点筛选| 达吉特标记法+非标记法系统性方案助力药理研究

小分子筛选下游靶点蛋白是药物发现、疾病机制研究以及生物学功能探究中的关键环节。小分子药物结合靶点蛋白的发现，不仅能帮助理解疾病的分子机制，也能指导药物的设计与优化，从而提高药效、减少副作用，并推动精准医疗的发展。达吉特针对此提供了两类不同的靶点筛选方案，方案一：基于修饰的策略，引入标记基团，提高筛选效率，便于后续分析，适用于可以进行生物素或炔基标记的小分子；方案二：非修饰策略，适用于不能够进行化学修饰的小分子，保持小分子原貌，技术难度较低，直接反应小分子与靶点的相互作用。从小分子标记到小分子靶点筛选再到小分子靶点蛋白的验证，达吉特具备全链条服务体系，帮助研究人员在多个阶段有效筛选和验证潜在的药物靶点。

丨方案一：基于修饰的策略

No.1 20K人类蛋白组芯片

芯片上有超过2万种人类全长蛋白质，覆盖81%的人类基因组ORF区，是目前世界上通量最高的蛋白质芯片。将带有生物素标记的小分子与20K芯片共同孵育，再引入带有CY3或CY5荧光的链霉亲和素，通过检测芯片上的荧光信号，即可确定小分子的直接结合靶蛋白。20K芯片不仅能够筛选出与小分子直接结合的靶点蛋白，还能解决传统方法中由于蛋白丰度低而难以捕捉的药-靶结合问题，更因其具备丰富的蛋白种类，单次实验即可产出多项科研成果，具有极高性价比。

丨技术路线

Step1：将小分子标记上生物素

Step2：标记了生物素的小分子和芯片共同孵育

Step3：加入带有荧光的链酶亲和素

Step4：固定波长下进行荧光检测，读取芯片上的荧光信号值

丨芯片优势

1. 筛选直接结合的靶点蛋白，假阳性率较低

2. 无需克隆构建、细胞培养和转染实验

3. 芯片覆盖多种蛋白类型，结合蛋白范围更广，性价比较高

4. 采用酵母表达纯化，蛋白丰度高，可检测到微弱蛋白互作现象

经典案例：20K芯片确定雷公藤红素的多靶点与多效性

温州医科大学药学院梁广教授团队使用生物素标记雷公藤红素，利用一次20K人类蛋白组芯片实验的结果寻找到其多个直接作用靶点蛋白，发现雷公藤红素能够直接靶向信号转导及转录激活蛋白3 （STAT3）和过氧化还原蛋白2（Prdx2）。确定雷公藤红素的直接靶点蛋白后，通过功能性实验证明了雷公藤红素在治疗胃癌和保护心脏方面发挥一定的作用。

No.2 GPCR膜蛋白芯片

G蛋白偶联受体（GPCR）是细胞表面最大、最通用的受体家族之一，约34%的已上市药物是与GPCR功能相关的。GPCR蛋白一般具有5-7次跨膜结构，脱离磷脂双分子层的支持，GPCR蛋白很难保持活性构象。目前研究GPCR最常用的方法是在转染的哺乳动物细胞系中过表达，然而转染的细胞也含有内源性受体，这给实验结果的解释带来了挑战。