15、肽纤维、异二聚体、水凝胶及化学合成实验详解

肽纤维、异二聚体、水凝胶及化学合成实验详解

1. 肽操作基础

在进行肽操作时，使用经默克密理博Milli - Q整体水纯化系统纯化的水。实验中用到两种重要的缓冲液：
- MOPS缓冲液 ：配制成10×溶液，最终（1×）浓度为MOPS 40 mM、醋酸钠10 mM、EDTA 1 mM。
- PBS缓冲液 ：含NaCl 137 mM、KCl 2.7 mM、Na₂HPO₄ 10 mM、KH₂PO₄ 1.8 mM。
两种缓冲液均用HCl和/或NaOH调至pH 7.4。

2. 肽纤维的制备与分析

2.1 肽纤维溶液的配制

将hSAF - p1（或其变体）和hSAF - p2按1:1比例混合，在pH 7.4的水性MOPS缓冲液中，每种肽的最终总浓度为50 μM。

2.2 后形成CuAAC修饰

修饰剂加入至最终浓度为100 μM，接着依次加入CuSO₄和抗坏血酸钠，使其最终浓度均为200 μM。反应混合物在室温下放置30分钟后进行分析。

2.3 纤维的CD光谱测量

在20℃（实心蓝色）和37℃（虚线红色）下测量。同时还研究了母体hSAFs（hSAF - p1 & hSAF - p2）和可修饰hSAFs（如hSAF - p1 - K1Z & hSAF - p2）的热展开（MRE₂₂₂的温度依赖性）以及在55℃（实心黄色）和退火后5℃（虚线紫色）的CD光谱。

2.4 纤维的TEM观察

• 样品制备：hSAF肽在