南方印迹（Southern Blot）和北方印迹（Northern Blot）是分子生物学中用于检测DNA和RNA的技术。南方印迹用于检测DNA，通过琼脂糖电泳分离，变性后转移至膜上，再用探针杂交确定特定DNA片段。北方印迹则针对RNA，用于检测mRNA的存在和含量。两者在操作上有相似之处，但变性步骤和所用试剂有所不同。探针标记通常涉及放射性和非放射性物质。
Southern Blot & Northern Blot
（一）Southern Blot
原理：
将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。
用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。
DNA => 琼脂糖电泳 => 印迹转移 => 预杂交 => 杂交（变性探针） => 洗膜 => 放射自显影或显色
（二）Northern Blot
原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。
用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。
mRNA提取 => 甲醛变性电泳 => 印迹转移 => 预杂交 => 杂交（变性探针） => 洗膜 => 放射自显影或化学发光
最低0.47元/天 解锁文章
扫一扫
709
被折叠的 条评论
为什么被折叠?
到【灌水乐园】发言
