DDPCR

本文介绍了2016年全球数字PCR和实时荧光定量PCR市场的规模,并对比了LIFE Technologies、Bio-Rad及RainDance三家主流数字PCR技术的特点与价格。此外,文章还探讨了液态活检技术,包括ctDNA、CTC和外泌体作为癌症检测标志物的作用及其在临床基因检测服务中的应用。

2016年全球数字PCR和实时荧光定量PCR市场将达$32.8亿


目前各家仪器公司推出自己的数字PCR,目前市场主流的是三家,

1、LIFE Technologies 3D数字PCR(芯片式数字PCR):

      我个人认为是微孔数字PCR,主要是将20ul反应体系分散到20000个微孔中进行反应,变成20000个反应体系,PCR反应结束后,采用CCD拍照,数阳性反应孔。

2、Bio-Rad的微滴数字PCR(油包水原理):

     将20ul反应体系采用液滴反应器形成20000个油包水反应体系,PCR反应结束后,才有流式细胞术的原理,检测每一个液体,数阳性反应的液滴数量。

3、RainDance 的数字PCR(油包水原理)、

    原理与伯乐微滴数字PCR相同,但是其液体形成能力比伯乐强很多,理论上可以产生1000万个小油滴。


价格从高到底:Raindance、Bio-Rad、LIFE Technologies。

目前本人使用的是Bio-Rad QX200、正在做实验室。


四、液态活检技术(ctDNA、CTC、外泌体)

“活检”即活体组织检查,是指从患者体内切取、钳取或穿刺等取出病变组织,进行病理学检查的技术

普通的活检通常要经过手术或者穿刺来获得组织样本,而且有时候需要反复多次的进行取样,不仅繁琐,给患者增加痛苦,而且有时候取样不准确,例如穿刺有时取到正常组织。而液态活检是对患者血液中的游离的标志物进行检查,不仅取样更加方便,而且能够在疾病的更早期获得检测结果。


癌症液态活检的标志物主要有三种:ctDNA、CTC、外泌体。

ctDNA(circulating tumor DNA)即循环肿瘤DNA,是人体血浆中游离的DNA (cell-free DNA,cfDNA)的一种,ctDNA是癌细胞死亡时产生的DNA碎片,携带了大量癌细胞的信息,因此通过分析血液ctDNA,可以了解患者癌细胞的突变情况。

ctDNA检测的技术平台:目前在ctDNA检测领域潜力最大的技术平台是第二代测序(NGS)和数字PCR(ddPCR),这两个技术灵敏度较高,保证了检出下限,ctDNA含量很低,大多低于cfDNA总量的1%,其他技术很难从正常组织DNA中检测出异常的ctDNA。



按照基因检测公司的服务内容,主要可以分为四类:

科研服务、

纯科研基因检测市场在百亿级别。


第三方临床基因检测服务、

高通量测序在临床检测上的应用当前受到限制,只有在试点名单上的机构才能出具正式的临检报告

目前出台了第一批四个领域的试点名单,分别是遗传病诊断、产前筛查与诊断、植入前胚胎遗传学诊断、肿瘤基因测序,

试点单位名单由卫计委医政医管局和妇幼司共同制定。临床基因检测的市场空间在千亿级别。


直接面向个人的检测服务、

3 提供面向个人基因检测服务的商业公司,提供的是非诊断性基因检测,

商业化B2C基因检测的市场空间在十亿级别。


非医疗基因检测服务(例如食品、环境、刑侦等方面的应用)。

4 非医疗基因检测服务的应用包括食品、环境微生物、刑侦检测、检验检疫等方面,

整体来看非医疗基因检测服务是碎片化市场,涉及领域多,空间在百亿级别。

第三方支付功能的技术人员;尤其适合从事电商、在线教育、SaaS类项目开发的工程师。; 使用场景及目标:① 实现微信与支付宝的Native、网页/APP等主流支付方式接入;② 掌握支付过程中关键的安全机制如签名验签、证书管理与敏感信息保护;③ 构建完整的支付闭环,包括下单、支付、异步通知、订单状态更新、退款与对账功能;④ 通过定时任务处理内容支付超时与概要状态不一致问题:本文详细讲解了Java,提升系统健壮性。; 阅读应用接入支付宝和建议:建议结合官方文档与沙微信支付的全流程,涵盖支付产品介绍、开发环境搭建箱环境边学边练,重点关注、安全机制、配置管理、签名核心API调用及验签逻辑、异步通知的幂等处理实际代码实现。重点与异常边界情况;包括商户号与AppID获取、API注意生产环境中的密密钥与证书配置钥安全与接口调用频率控制、使用官方SDK进行支付。下单、异步通知处理、订单查询、退款、账单下载等功能,并深入解析签名与验签、加密解密、内网穿透等关键技术环节,帮助开发者构建安全可靠的支付系统。; 适合人群:具备一定Java开发基础,熟悉Spring框架和HTTP协议,有1-3年工作经验的后端研发人员或希望快速掌握第三方支付集成的开发者。; 使用场景及目标:① 实现微信支付Native模式与支付宝PC网页支付的接入;② 掌握支付过程中核心的安全机制如签名验签、证书管理、敏感数据加密;③ 处理支付结果异步通知、订单状态核对、定时任务补偿、退款及对账等生产级功能; 阅读建议:建议结合文档中的代码示例与官方API文档同步实践,重点关注支付流程的状态一致性控制、幂等性处理和异常边界情况,建议在沙箱环境中完成全流程测试后再上线。
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