45、腺相关病毒生产、脊髓注射及化学遗传学受体应用全解析

腺相关病毒生产、脊髓注射及化学遗传学受体应用全解析

在生物医学研究领域，腺相关病毒（AAV）的生产与脊髓注射技术，以及化学遗传学受体的应用，对于深入理解神经系统的功能和机制具有至关重要的意义。下面我们将详细介绍这些技术的相关内容。

1. AAV 生产相关 PCR 流程

在 AAV 生产过程中，PCR 扩增是一个关键步骤。其具体的循环参数如下：
- 进行 35 个循环，每个循环包括：
- 在 95°C 下变性 20 秒。
- 根据引物结合特性，在 50 - 60°C 下退火 20 秒。
- 以每千碱基 1 分钟的速度在 68°C 下进行延伸。
- 最后在 68°C 下进行 5 分钟的最终延伸。

扩增完成后，需使用 0.8 - 1.2% 的 TBE 琼脂糖凝胶进行检测，具体凝胶浓度取决于计算得到的扩增子大小。除了预期的扩增子外，可能还会检测到比计算值更短或更长的额外条带。之后，还需要将 Sanger DNA 测序结果（色谱图）和扩增子与整个 AAV 载体基因组进行计算机比对，色谱图的长度通常在 500 - 700 个核苷酸之间，使用质粒 DNA 作为模板 DNA 时长度会稍短。

2. 脊髓注射所需材料

脊髓注射是将 AAV 导入脊髓的重要手段，在此过程中需要用到多种设备、手术工具和消耗品，具体如下：
- 设备 ：
1. 微量移液器拉制仪（Zeitz, DMZ - Universal - Electrode Puller）
2. 手术显微镜（Zeiss, OPMI Pico）
3. 麻醉装置（Weinmann, Ox