44、AAV 载体制备与质量控制技术详解

AAV 载体制备与质量控制技术详解

1. AAV 载体浓度计算

在 AAV 载体的制备过程中，准确计算其浓度是非常关键的步骤，这有助于后续实验的顺利进行。以下是详细的计算步骤和相关公式：

1.1 非变性样本中外源双链 DNA 库存浓度计算

通过测量非变性样本的浓度，并结合总体积和样本体积，可以计算出外源双链 DNA 的库存浓度。计算公式如下：
[
\text{测量的非变性样本浓度（ng/ml）} \times \frac{200\ \mu\text{l 总体积}}{\text{样本体积（}\mu\text{l）}} = \text{外源双链 DNA 库存浓度（ng/ml）}
]

1.2 总双链 DNA 库存浓度计算

总双链 DNA 库存浓度包括外源（非封装的、背景）和封装（病毒内）的双链 DNA。通过测量热变性样本的浓度，同样结合总体积和样本体积进行计算。公式如下：
[
\text{测量的热变性样本浓度（ng/ml）} \times \frac{200\ \mu\text{l 总体积}}{\text{样本体积（}\mu\text{l）}} = \text{外源 + 病毒内双链 DNA 库存浓度（ng/ml）}
]

1.3 封装（病毒内）双链 DNA 浓度计算

封装的双链 DNA 浓度可以通过总双链 DNA 库存浓度减去外源双链 DNA 库存浓度得到。公式为：
[
\text{总双链 DNA 库存浓度} - \text{外源双链 DNA 库存浓度} = \text{病毒内双链 DNA 库存浓度（ng/ml）} <