8、使用翻译核糖体亲和纯化技术（TRAP）进行实验的详细指南

使用翻译核糖体亲和纯化技术（TRAP）进行实验的详细指南

1. 组织（DRG）解剖

在进行组织解剖前，需做好充分的准备工作：
- 用70%乙醇和RnaseZap清洁工作台和工具，确保操作环境无RNA酶污染。
- 用异氟醚麻醉小鼠，然后进行断头操作。使用DFP手电筒确认小鼠EGFP表达及基因型是否正确，可将光照直接照射在预期表达EGFP的组织上进行确认。
- 手动解剖背根神经节（DRG），并将组织置于冰上的解剖缓冲液（15 - mL管）中。需注意，解剖时间应控制在最长10分钟内，这对后续实验的成功至关重要。若需从多只动物中收集DRG，每只小鼠需由一人负责解剖，同时要尽可能避免血液污染，因为血液中含有RNA酶。
- 将装有收集好的DRG的15 - mL管在冷室中离心约1分钟，然后使用长的Dumont SS精细镊子将DRG转移到Precellys匀浆CKMix管中。

以下是快速DRG提取的推荐解剖方法：
1. 用异氟醚麻醉小鼠。
2. 将小鼠腹部朝下放在蓝色垫子上，检查爪子反射。
3. 用大剪刀迅速在小鼠颈部边缘切断进行断头，让小鼠流血。
4. 用70%乙醇喷洒背部毛发，然后剪掉皮肤。
5. 在脊椎底部靠近髂骨处切割。
6. 沿着脊柱两侧切割，去除附着在脊柱上的任何组织。
7. 取出脊柱后，切除背侧的多余组织，使脊柱暴露，这对脊柱的良好半切至关重要。
8. 握住脊柱，使背侧朝上，将小剪刀的一个尖端放入含有脊髓的开口中，沿着脊柱背侧切割，尽量切直，且不要取出剪刀，然后沿着脊髓腹侧切割以完成半切。将其中一个切片放入装有解剖缓冲液的管中，用于临时储存脊柱切片。
9. 用另一个切片，小