7、使用翻译核糖体亲和纯化（TRAP）技术解析疼痛状态下细胞特异性翻译组

使用翻译核糖体亲和纯化（TRAP）技术解析疼痛状态下细胞特异性翻译组

1. 引言：为何在疼痛研究中使用TRAP技术

1.1 转录组不等于翻译组：mRNA水平并非总是与蛋白质水平相关

慢性疼痛是一种复杂的疾病，其特征是感觉神经元具有持续的可塑性。在描绘感觉神经节的转录组以及其在慢性疼痛状态下的变化方面，已经取得了很大进展。然而，mRNA丰度通常与蛋白质丰度的相关性较弱，这种差异可归因于翻译控制机制。因此，需要其他技术来识别体内细胞中正在翻译的mRNA。翻译控制机制对于伤害感受器的可塑性至关重要，但对于与核糖体相关的下游mRNA（即活跃的翻译组），以及这些mRNA如何翻译产生介导这种可塑性的新蛋白质，我们了解相对较少。

核糖体是一种大型核糖核蛋白复合物，在真核生物中由大（60S）和小（40S）核糖体亚基组成，它介导mRNA的翻译过程。mRNA首先被起始因子招募到40S亚基，该亚基从5’端到3’端扫描mRNA，直到到达起始密码子（起始步骤）。然后，60S亚基加入复合物，组装好的80S核糖体与其他延伸因子一起沿着mRNA的编码区运行，产生编码的多肽（延伸步骤）。核糖体蛋白L10a是大60S亚基的一部分，对于将40S和60S亚基组装成功能性80S核糖体是必需的。当到达终止密码子时，肽链释放因子导致新生多肽的释放，并使核糖体与mRNA分离（终止步骤）。

使用TRAP方法，研究人员可以暂停蛋白质合成，免疫沉淀核糖体并分离相关的mRNA。这些mRNA可以通过多种高通量方法进行鉴定，最常见的是RNA测序（RNA-seq）。这种方法允许以细胞类型特异性的方式研究翻译组。我们使用该方法更直接地研究了在疼痛状态下可能驱动伤害感受器生理变化的分子。

1.2 T