纳米抗体如何“精准锁定”食源性致病菌？——详解单增李斯特菌检测新方案

在食品安全问题日益受到关注的今天，食源性致病菌的快速、准确检测成为行业的关键挑战之一。单增李斯特菌（Listeria monocytogenes）作为一种常见的低温耐受型致病菌，尤其常在冷藏肉制品、乳制品及即食食品中被检出，严重时可引发脑膜炎、败血症等疾病，威胁人类健康。传统检测方法包括细菌培养、PCR技术等，虽可靠性高，却存在耗时长、步骤繁琐、设备要求高等局限。近年来，基于纳米抗体（Nanobody）的检测技术崭露头角，正在悄然改变这一现状。

什么是纳米抗体？
纳米抗体实则为驼科动物（如羊驼）体内天然缺乏轻链的重链抗体可变区（VHH），其分子量仅15 kDa，远小于传统IgG抗体。它不仅具备良好的稳定性、易表达性和高亲和力，还因CDR3区较长且结构特殊，可结合传统抗体难以触及的隐藏表位，因此在病原识别和检测中显示出独特优势。

新技术如何实现“精准检测”？
一项由吉林大学研究团队开发的检测方案，通过噬菌体展示技术筛选出针对单增李斯特菌MurA蛋白的纳米抗体，并成功构建双抗体夹心ELISA体系。该研究的关键步骤包括：

高纯度抗原制备：利用原核表达系统获得纯度超90%的MurA蛋白；

羊驼免疫与文库构建：免疫后提取淋巴细胞RNA，通过巢式PCR扩增VHH基因，成功构建容量3×10⁸、多样性丰富的纳米抗体噬菌体文库；

高通量筛选：经三轮“吸附-洗脱-扩增”循环，从库中筛选出12条高亲和力序列，其中8条可同时结合MurA蛋白与全菌；

体系优化与验证：确定以rMurANb1为捕获抗体、噬菌体MurA4H8为检测抗体的最佳配对，在优化反应条件后，检测限达到3.80×10³ CFU/mL，加标回收率85%–106%，且与其他常见菌无交叉反应。

技术优势与应用前景
该检测方法在灵敏度、特异性和稳定性方面表现优异，尤其适用于食品工业中的现场快速筛查。相比传统方法，其操作更简便、成本更低、检测周期大幅缩短，在生鲜食品、冷链物流和中大型食品企业中具备广泛推广潜力。

此外，纳米抗体技术不仅可用于致病菌检测，还在环境监测、临床诊断及其他病原快检中展现出良好的扩展性。随着合成生物学与蛋白工程技术的进步，未来有望实现更高通量、更低成本的纳米抗体开发，为食品安全保驾护航。

结语
纳米抗体凭借其独特结构优势和可定向改造特性，正在成为新一代免疫检测工具的核心。这项针对单增李斯特菌的创新检测方案，不仅为行业提供了可靠的技术选择，也彰显了生物技术在解决实际应用问题中的巨大潜力。