生物小白必看：13种组织切片染色实用攻略——原理、步骤、结果与注意事项

目录

1．HE染色 （Hematoxylin and Eosin, 苏木精-伊红染色)

2．Masson染色 (Masson’s Trichrome, 马松三色染色)

3．番红-固绿染色 (Safranin-Fast Green Staining)

4．TTC染色 (TTC Staining)

5．免疫组化染色(Immunohistochemistry Staining)

6．PAS染色 (Periodic Acid-Schiff Staining, 过碘酸-希夫染色)

7．油红O染色 (Oil Red O Staining)

8．阿利新蓝染色(Alcian Blue Staining)]

9．阿利新蓝-PAS染色 (AB-PAS Staining)]

10．尼氏染色(Nissl Staining)

11．刘氏染色(Giemsa Staining, 吉姆萨染色)

12．普鲁士蓝染色（Prussian Blue Staining）

13．高尔基染色(Golgi Staining)

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1. HE染色 (Hematoxylin and Eosin, 苏木精-伊红染色)

基本原理

HE染色是组织学和病理学中最常用的染色技术，用于观察组织切片的细胞和结构细节。其原理基于两种染料的选择性结合：

•苏木精（Hematoxylin）：一种碱性染料，需氧化为苏木素后与金属盐（如铝盐）形成复合物，与细胞核中的核酸（DNA和RNA）结合，染成蓝紫色。

•伊红（Eosin）：一种酸性染料，与细胞质中的碱性蛋白质和细胞外基质（如胶原纤维）结合，呈现粉红色或红色。 通过蓝紫色细胞核与粉红色细胞质的对比，HE染色清晰显示组织结构和病理变化。

实验步骤

1.准备：将组织固定于10%中性缓冲甲醛（pH 7.2-7.4）中至少24小时，避免过度固定导致组织硬化。制备石蜡切片，厚度通常为4-6微米，贴于载玻片上烘干。

2.脱蜡与复水：将切片置于二甲苯中脱蜡2次，每次5-10分钟（根据石蜡厚度调整）。通过乙醇梯度复水：100%乙醇2次，每次3分钟；95%乙醇1次，3分钟；70%乙醇1次，3分钟；最后浸入蒸馏水中1分钟。

3.苏木精染色：将切片浸入哈里斯苏木精（Harris Hematoxylin）溶液中染色5-10分钟（薄切片5分钟，厚切片或核丰富组织10分钟）。可选：Mayer’s Hematoxylin也可使用。

4.冲洗与蓝化：用流动自来水冲洗1-2分钟，去除多余苏木精。浸入蓝化液（如0.2%氨水或Scott’s自来水代用品：碳酸氢钠2g+硫酸镁20g溶于1L水）处理30秒-1分钟，使细胞核呈深蓝色。

5.伊红反染：将切片浸入酒精性伊红溶液（0.5%伊红溶于95%乙醇）中染色1-3分钟，显微镜下监控染色强度。

6.脱水与封片：通过乙醇梯度脱水：70%乙醇30秒，95%乙醇2次，每次1分钟，100%乙醇2次，每次1分钟。用二甲苯澄清2次，每次5分钟。用中性树脂（如DPX）封片，确保盖玻片覆盖整个切片，无气泡。

结果

•细胞核：蓝紫色。

•细胞质和细胞外基质：粉红色或红色。

应用场景

HE染色广泛用于常规组织学检查，显示组织结构和细胞形态，特别适用于癌症诊断（如乳腺癌、肺癌）以观察肿瘤细胞的异型性和浸润性。

注意事项

•pH调节：长期固定可能导致组织酸化，影响苏木精着色，需用自来水冲洗5-10分钟或饱和碳酸锂溶液处理10-30分钟恢复中性。

•分色控制：苏木精染色后可用1%盐酸乙醇（1mL浓盐酸+99mL 70%乙醇）分色数秒，显微镜下观察至细胞核清晰、细胞质无色，避免过分色导致核染色过浅。

•脱水彻底：若脱水后切片入二甲苯出现白色浑浊，表明残留水分，需退回100%乙醇重新脱水。

•避免干燥：染色过程中切片暴露空气超过30秒会导致干燥，引起组织收缩和变形，需保持湿润。

•切片清洁：从二甲苯取出或放入前，用滤纸擦拭载玻片边缘水分，避免污染染液。

•封片质量：中性树脂封片时，避免树脂过稀（易流动）或过浓（难涂匀），确保无气泡。

•污染预防：苏木精和伊红溶液需每周过滤一次，去除沉淀物。

•低温处理：冬季室温低于14℃时，二甲苯需置于30℃温箱预热，确保脱蜡均匀。

•蓝化重要性：蓝化步骤确保细胞核呈深蓝色，增强核质对比度。

2. Masson染色 (Masson's Trichrome Staining, 马松三色染色)

基本原理

Masson三色染色通过多种染料区分组织成分，突出胶原纤维和肌肉纤维的分布：

•苏木精或铁苏木精：苏木精染细胞核呈蓝紫色，铁苏木精（如Weigert铁苏木精）染成黑色。

•酸性洋红或酸性富辛：染肌肉纤维、细胞质和红细胞呈红色。

•茜素蓝或快速绿：染胶原纤维分别呈蓝色或绿色。 染料组合因实验室习惯有所不同（如Bouin固定液后用铁苏木精和酸性富辛），通过颜色对比显示组织结构和纤维化程度。

实验步骤

1.脱蜡与复水：用二甲苯脱蜡2次，每次5-10分钟。通过100%乙醇（2次，每次3分钟）、95%乙醇（3分钟）、70%乙醇（3分钟）复水至蒸馏水。

2.苏木精染色：用Weigert铁苏木精（A液：1%苏木精乙醇溶液，B液：1.2%三氯化铁水溶液，等量混合）染色5-10分钟，细胞核呈黑色。

3.水洗：用蒸馏水冲洗2次，每次1分钟，去除多余染料。

4.酸性洋红/富辛染色：用酸性富辛（Ponceau-Fuchsin）溶液（1g酸性富辛+0.5mL冰醋酸+100