【整理】HUVEC、NIH3T3、H9C2、HaCaT、BXPC-3等细胞株培养时注意事项

NIH3T3（小鼠胚胎成纤维细胞）

规格：1×10^6/瓶 或1ml冻存管

细胞来源：ATCC

培养条件：DMEM(H)+10%NCS (货号：HN-FBS-500)

细胞特性：贴壁（成纤维细胞样）

温度：37℃

气相：95%空气，5%二氧化碳

运输方式；复苏细胞常温运输/冻存细胞干冰运输 NIH3T3（小鼠胚胎成纤维细胞）

传代：

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代，一般2到3天换一次液；

2.待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，传代比例为1:3到1:6；

3.传代步骤：将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为最佳消化时间，记录最佳消化时间，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。

NIH3T3（小鼠胚胎成纤维细胞）冻存：无血清细胞冻存液（货号：H-W-100） NIH3T3（小鼠胚胎成纤维细胞）

注意事项： 1.使用新生牛血清NCS而非胎牛血清FBS培养该细胞，推荐使用HAKATA新生牛血清。 2.不要让细胞长得过满乃至开始融合，在细胞密度为70-80%之前就传代。 3.传代时不要消化过度，当细胞完全皱缩开始脱落的时候及时终止消化，消化时不要晃动或敲打培养瓶。北京泽平科技提供 900多种原代细胞、700余种细胞系（株）供应以及STR细胞鉴定，~网页搜索“泽平科技”进入咨询报价！

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