AbMole|AbMole增强型ATP细胞活力检测试剂盒（目录号 M55403）

AbMole增强型ATP细胞活力检测试剂盒 (也称发光法细胞活力检测试剂盒，Cell Counter-Lumi cell viability assay kit，CCL) 是一种通过化学发光法测定细胞内 ATP 含量从而用于超高信号稳定性、超高灵敏度、超宽线性范围定量检测活细胞数目的试剂盒。本产品发光信号稳定，操做简便，试剂反应时间短，仅 10 min 即可检测，检测灵敏度高，线性范围宽。

ATP 作为最重要的能量分子，在细胞的各种生理、病理过程中起着重要作用。ATP 是细胞新陈代谢的一个重要指标，也是具有代谢活性细胞的重要标志性分子，并和活细胞数目成良好的线性关系。因此，ATP 含量能很好地反应活细胞的数目，即本试剂盒可以通过测定 ATP 含量来进行细胞计数或检测细胞活力。本试剂盒通过 ATP 检测细胞活力的原理，借助 ATP 依赖的萤光素酶（Luciferase）催化氧化荧光素底物（Luciferin）产生光信号，且发光强度与 ATP 含量呈正相关，从而实现间接测定细胞活性及细胞数目。

本产品检测灵敏度高，线性范围宽，可以在 2×104万个细胞范围内呈现良好的线性关系。不同细胞的检测数量上限可能会有不同；稳定性好，在-20℃长期保存检测效果不受影响；使用灵活便捷，不仅适合少量样品的检测，也适合大量样品的高通量筛选(high-throughput screening)检测。

 

使用说明：

1. 使用前需将本品恢复至室温。

2. 在 96 孔板中，使用 100 μL 细胞培养液和 100 μL 的检测试剂，总体积为 200 μL。对于 384 孔板，推荐使用 25 μL 细胞培养液和 25 μL 的检测试剂，总体积为 50 μL。也可以用其它体积的试剂进行检测，但细胞培养液和检测试剂体积的比例须为 1:1。虽然有数据显示适当减少检测试剂的用量也很可能会得到较好的结果，但对于细胞数量特别多、细胞数量特别少或者重复性要求比较高的情况，建议按照推荐用量进行检测。

3. 细胞的准备

使用适合进行化学发光检测的 96 孔板，每孔接种 100 μL 细胞（如使用 384 孔板，每孔接种 25 μL 细胞，具体用量视不同类型的 384 孔板而定），并确保检测时每孔的细胞数量在 2 万个以内（如使用 384 孔板宜控制在 4000 个以内），同时设置不含细胞的培养液孔作为阴性对照，按照细胞培养的常规方法培养细胞。如有需要，可加入药物处理细胞。此外，如有必要，也可以设置细胞的浓度梯度，以便后续确定试剂盒的使用效果。

4. ATP 标准曲线的设置（选做）

把自备的 ATP 标准溶液用 PBS 或细胞培养液稀释成适当的浓度梯度。初次检测可以设置 0、1、10、100、1000 nM 这几个浓度，96 孔板每孔加入 100 μL 的标准品。如有必要，在后续的实验中可以根据细胞中的 ATP 含量对标准品的浓度范围进行适当调整。如果用细胞培养液来稀释 ATP 标准品，稀释后需立即进行后续的发光检测，否则培养液中的 ATPase 等可以消耗 ATP 的酶会导致 ATP 含量下降。

5. 检测试剂的准备

1）将储存在-20℃的 CCL 发光法检测试剂恢复至常温，首次使用建议适当分装该试剂。反复冻融对其检测效果可能有影响。

2）按照 96 孔板每孔 100 μL（384 孔板每孔 25 μL）的量，取适量 CCL 发光法检测试剂，恢复至常温。

6. 细胞活力检测

1）取出细胞培养板在室温平衡 10 min。

2）96 孔板每孔加入 100 μL CCL 发光法检测试剂（384 孔板每孔 25 μL）。

3）室温振荡 2 min，以促进细胞的裂解。

4）室温（约 25 ℃）孵育 10 min，使发光信号趋于稳定。

5）使用具有检测化学发光功能的多功能酶标仪进行化学发光检测。请根据仪器要求设置相应的参数，每个孔的检测时间一般为 0.25-1 s 或更长时间，具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。

6）根据化学发光读数直接计算细胞的相对活力，或根据 ATP 标准曲线计算出 ATP 的量从而计算出细胞的相对活力。对于培养细胞和 ATP 标准品的检测效果可以参考本说明书提供的标准曲线，细胞在 0-2×104 个细胞/孔的细胞密度范围内有良好的线性关系，ATP 标准品 0-1000 nM 浓度范围有良好的线性关系。

保存条件： -20ºC 避光保存，有效期一年。

注意事项：

1. 萤光素酶（Luciferase）的活性对温度比较敏感，所以反应前细胞和检测试剂均需平衡至室温后再进行测定。

2. 本试剂盒的检测试剂中含有萤光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。建议第一次解冻后可适当分装保存，但需注意分装的容器不能有 ATP 污染。

3. 待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰萤光素酶反应，从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。经测试，最终反应体系中 DMSO 含量在 2%以内不会对反应产生影响。

4. 检测时须使用适合于细胞培养的白色或黑色的 96 孔板或 384 孔板。如果使用普通透明的 96 孔板或 384 孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。说明中所提供的检测 ATP 标准品的方法，实际检测细胞相对活力时通常并不需要检测 ATP 标准品。